Продукция
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 2019-nCoV өчен ачыклау комплекты
Көтелгән куллану
Бу комплект яңа коронавирусны (2019-nCoV) сыйфатлы ачыклау өчен кулланыла, тамак кабаклары, насофарингаль караклар, бронхоальвеолар лава сыеклыгы, какырык. Бу продуктны ачыклау нәтиҗәләре клиник белешмәлек өчен генә кулланыла, һәм клиник диагностика һәм дәвалау өчен бердәнбер дәлил буларак кулланылырга тиеш түгел.
Тикшерү принцибы
Комплект бер этаплы RT- PCR технологиясенә нигезләнгән. Чынлыкта, 2019 яңа коронавирус (2019-nCoV) ORF1ab һәм N геннары көчәйтү максаты итеп сайланганнар. Конкрет праймериз һәм флуоресцент зоналар (N ген пробалары FAM белән язылган, ORF1ab пробалары HEX белән маркировкаланган) үрнәкләрдә 2019 яңа типтагы коронавирус РНКны ачыклау өчен эшләнгән. Комплект шулай ук үрнәк җыю, РНК һәм PCR көчәйтү процессын күзәтү өчен эндоген эчке контроль ачыклау системасын (CY5 белән билгеләнгән эчке контроль ген) кертә, шуның белән ялган тискәре нәтиҗәләрне киметә.
Төп компонентлар
| Компонентлар | Том（48Т / комплект） |
| RT-PCR реакция чишелеше | 96µл |
| nCOV праймер TaqMan проблемасы （ORF1ab, N Ген, RnaseP Ген） | 864µл |
| Тискәре контроль | 1500µл |
| nCOV Позитив контроль OR l ORF1ab N Ген） | 1500µл |
Ownз реагентлары: РНК чыгару яки чистарту реагентлары. Тискәре / уңай контроль: Позитив контроль - максатчан фрагментны үз эченә алган РНК, ә тискәре контроль - нуклеин кислотасы булмаган су. Куллану вакытында алар чыгаруда катнашырга һәм йогышлы дип саналырга тиеш. Алар тиешле кагыйдәләр нигезендә эшкәртелергә һәм утильләштерелергә тиеш.
Эчке белешмә ген - кеше RnaseP гены.
Саклау шартлары һәм куллану вакыты
-20 ± 5 ℃, кат-кат туңдырудан һәм эрүдән 5 тапкыр артык сакланыгыз, 6 ай дәвамында.
Кулланыла торган корал
FAM / HEX / CY5 һәм башка күп каналлы флуоресцент PCR коралы белән.
Specрнәк таләпләр
1. Кулланыла торган үрнәк төрләре ： тамак кабаклары, назофарингаль караклар, бронхоальвеолар лава сыеклыгы, балчык。
2.Спекимен җыю (асептик техника）
Фарингаль сваб: Тонсилны һәм арткы фарингаль стенаны берьюлы ике карак белән сөртегез, аннары үрнәк башын сынау трубасына чумыгыз.
Балыкчы: Пациент тирән йөткергәннән соң, йөртелгән балчыкны сайлау эремәсе булган винт капка сынау трубасына җыегыз. бронхоальвеолар лава сыеклыгы medical Медицина белгечләре тарафыннан үрнәк алу. 3. sрнәкләрне саклау һәм ташу
Вирусны изоляцияләү һәм РНК тестлары өчен үрнәкләр мөмкин кадәр тизрәк тикшерелергә тиеш. 24 сәгать эчендә ачыклана торган үрнәкләр 4 at сакланырга мөмкин; 24 эчендә табып булмый
сәгатьләр -70 ℃ яки түбәндә сакланырга тиеш (-70 of саклау шартлары булмаса, алар булырга тиеш
вакытлыча -20 ℃ суыткычта саклана). Transportрнәкләр ташу вакытында кат-кат туңудан һәм эрүдән сакланырга тиеш. Collectionрнәкләр җыюдан соң тизрәк лабораториягә җибәрелергә тиеш. Әгәр дә үрнәкләрне ерак араларга ташырга кирәк булса, коры боз саклау тәкъдим ителә.
Тест ысуллары
1 ampleрнәк эшкәртү һәм РНК чыгару (эшкәртү үрнәге)
РНК алу өчен 200μл сыеклык үрнәге алырга киңәш ителә. Бәйләнешле чыгару адымнары өчен коммерция РНК чыгару комплектлары күрсәтмәләренә мөрәҗәгать итегез. Тискәре дә, тискәре дә
бу комплекттагы контрольләр чыгаруда катнашкан.
2 PCR реагент әзерләү (реагент әзерләү өлкәсе)
2.1 Барлык компонентларны комплекттан чыгарыгыз һәм эретегез һәм бүлмә температурасында кушыгыз. Centентрифуга 8000 әйләнештә берничә секундка кадәр; кирәкле реагентларны исәпләгез, һәм реакция системасы түбәндәге таблицада күрсәтелгәнчә әзерләнгән:
| Компонентлар | N хезмәт күрсәтү (25µл система) |
| nCOV праймер TaqMan проблемасы | 18 µl × N. |
| RT-PCR реакция чишелеше | 2 µl × N. |
| * N = сыналган үрнәкләр саны + 1 (тискәре контроль) + 1 (nCOVуңай контроль) | |
2.2 Компонентларны яхшылап кушканнан соң, центрифуга кыска вакыт эчендә труба диварындагы барлык сыеклык труба төбенә төшсен өчен, аннары PCR трубасына 20 µл көчәйтү системасын аликотлаштырыгыз.
3 plрнәк алу (үрнәк әзерләү өлкәсе)
Чыгарылганнан соң 5μл тискәре һәм уңай контроль өстәргә. Тикшерелергә тиешле үрнәкнең РНКсы PCR реакция трубасына өстәлә.
Трубаны тыгыз һәм центрифуга 8000 әйләнештә берничә секунд эчендә көчәйтегез, аны көчәйтүне ачыклау өлкәсенә күчергәнче.
4 PCR көчәйтү (көчәйтелгән ачыклау өлкәсе)
4.1 Реакция трубасын коралның үрнәк күзәнәгенә урнаштырыгыз, параметрларны түбәндәгечә куегыз:
| этап | Cyикл саны | Температура(° C) | Вакыт | коллекциясайт |
| Киретранскрипция | 1 | 42 | 10мин | - |
| Денатуратиягә кадәрn | 1 | 95 | 1мин | - |
| Cyикл | 45 | 95 | 15с | - |
| 60 | 30с | мәгълүмат җыю |
Инструментны ачыклау каналын сайлау: Флуоресцент сигнал өчен FAM 、 HEX 、 CY5 каналын сайлагыз. Флюоресцент NONE сылтамасы өчен ROX-ны сайламагыз.
5 Нәтиҗә анализы (зинһар, көйләү өчен һәр коралның эксперименталь күрсәтмәләренә мөрәҗәгать итегез)
Реакциядән соң нәтиҗәләрне саклагыз. Анализ ясаганнан соң, логарифмик графикта башлангыч бәяне, бетү бәясен, база бәясен бәяләгез (кулланучы фактик ситуация буенча көйли ала, башлангыч кыйммәтне 3 ~ 15 итеп куярга мөмкин, бетү бәясе 5 ~ 20 итеп көйләнергә мөмкин) Тәрәзә бусагасында, бусага сызыгы логарифмик фазада яки тискәре контроль сызыгы астында.
6 Саклану контроле test Процессуаль контроль тестка кертелгән ative Тискәре контроль: FAM, HEX, CY5 ачыклау каналлары өчен ачык көчәйтү сызыгы юк.
COV уңай контроль: FAM һәм HEX ачыклау каналларының ачык көчәйтү сызыгы, Ct value≤32, ләкин CY5 каналының көчәйтү сызыгы юк;
Aboveгарыдагы таләпләр бер үк экспериментта бер үк вакытта үтәлергә тиеш; югыйсә, эксперимент дөрес түгел һәм аны кабатларга кирәк.
7 Нәтиҗәне билгеләү.
7.1 Әгәр сынау үрнәгенең FAM һәм HEX каналларында көчәйтү сызыгы яки Ct бәясе> 40 булмаса, һәм CY5 каналында көчәйтү сызыгы булса, үрнәктә 2019 яңа коронавирус (2019-nCoV) РНК юк дип бәяләргә мөмкин;
.2 Әгәр сынау үрнәгендә FAM һәм HEX каналларында ачык көчәйтү сызыклары булса, һәм Ct бәясе ≤40 булса, бу үрнәк 2019 яңа коронавирус (2019-nCoV) өчен уңай дип бәяләнергә мөмкин.
7.3 Әгәр сынау үрнәгендә FAM яки HEXның бер каналында ачык көчәйтү сызыгы булса, һәм Ct бәясе ≤40 булса, һәм башка каналда көчәйтү сызыгы булмаса, нәтиҗәләрне кире кайтарырга кирәк. Әгәр рестет нәтиҗәләре эзлекле булса, үрнәк яңа өчен уңай дип бәяләнергә мөмкин
коронавирус 2019 (2019-nCoV). Әгәр дә рестет нәтиҗәләре тискәре булса, 2019-нчы яңа коронавирус (2019-nCoV) өчен үрнәк тискәре дип бәяләргә мөмкин.
Позитив хөкем бәясе
ROC кәкре ысулы комплектның CT бәясен билгеләү өчен кулланыла, эчке контроль белешмә бәясе 40.
Тест нәтиҗәләрен аңлату
1.Бер эксперимент тискәре һәм уңай контроль өчен сыналырга тиеш. Тест нәтиҗәләре контроль контроль сыйфат таләпләренә туры килгәндә генә билгеле була
2.Фам һәм HEX ачыклау каналлары уңай булганда, CY5 каналыннан (эчке контроль канал) нәтиҗә система көндәшлеге аркасында тискәре булырга мөмкин.
3. Эчке контроль нәтиҗәсе тискәре булганда, сынау трубасының FAM һәм HEX ачыклау каналлары да тискәре булса, бу система инвалид яки операция дөрес түгел, тест дөрес түгел дигән сүз. Шуңа күрә, үрнәкләрне кире кайтарырга кирәк.
